液相色譜儀的組成及分類

液相色譜儀的組成及分類

一. 高壓輸液系統(tǒng)

     貯液裝置、高壓輸液泵、過濾器、脫氣裝置等

1. 貯液器：貯液器用于存放溶劑。溶劑必須很純，貯液器材料要耐腐蝕，對溶劑呈惰性。貯液器應(yīng)配有溶劑過濾器，以防止活動相中的顆粒進(jìn)進(jìn)泵內(nèi)。溶劑過濾器一般用耐腐蝕的鎳合金制成，空隙大小一般為2mm。

2. 脫氣裝置：脫氣的目的是為了防止活動相從高壓柱內(nèi)流出時，開釋出氣泡進(jìn)進(jìn)檢測器而使噪聲劇增，甚至不能正常檢測。

3. 高壓輸液泵  高壓輸液泵是液相色譜儀的重要部件，是驅(qū)動溶劑和樣品通過色譜柱和檢測系統(tǒng)的高壓源，其性能好壞直接影響分析結(jié)果的可靠性。

    對高壓泵的基本要求是：

    ①流量穩(wěn)定；②輸出壓力高，zui高輸出壓力為50Mpa；③流量范圍寬，可在0.01～10ml／min范圍任選。④耐酸、堿、緩沖液腐蝕。⑤壓力波動小。

2. 梯度洗脫裝置  梯度洗脫是利用兩種或兩種以上的溶劑，按照一定時間程序連續(xù)或階段地改變配比濃度，以達(dá)到改變活動相極性、離子強度或pH值，從而進(jìn)步洗脫能力，改善分離的一種有效方法。當(dāng)一個樣品混合物的容量因子是范圍很寬，用等度洗脫時間太長，且后出的峰形扁平不便檢測時，用梯度洗脫可以改善峰形、并縮短分離時間。HPLC的梯度洗脫與GC的程序升溫相似，可以縮短分析時間，進(jìn)步分離效果。使所有的峰都處于*分離狀態(tài)，而且峰形尖而窄。

二. 進(jìn)樣器

    進(jìn)樣器一般要求密封性好，死體積小，重復(fù)性好，保證中心進(jìn)樣，進(jìn)樣時對色譜系統(tǒng)的壓力和流量波動小，并便于實現(xiàn)自動化。

    高壓進(jìn)樣閥是目前廣泛采用的一種方式。閥的種類很多，有六通閥、四通閥，雙路閥等。以六通進(jìn)樣閥zui為常用。

 三.分離系統(tǒng)

    色譜分離系統(tǒng)包括色譜柱、固定相和活動相。色譜柱是其核心部分，柱應(yīng)具備耐高壓、耐腐蝕、抗氧化、密封不漏液和柱內(nèi)死體積小、柱效高、柱容量大、分析速度快、柱壽命長的要求。通常采用不銹鋼管制成。

    色譜柱按內(nèi)徑不同可分為常規(guī)柱、快速柱和微量柱三類。

    常規(guī)分析柱柱長一般為10~25cm，內(nèi)徑4 ~ 5mm，固定相顆粒直徑為 5 ~ 10 mm。為了保護(hù)分析柱不受污染，一般在分析柱前加一短柱，約數(shù)厘米長，稱為保護(hù)柱。

（微量分析柱內(nèi)徑小于l mm，凝膠色譜往內(nèi)徑3～12 mm，制備往內(nèi)徑較大，可達(dá)25 mm以上。）

四. 檢測系統(tǒng)

    檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測的信號，常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。

 1. 紫外可見吸收檢測器（ultraviolet－visible detector，UVD）

紫外可見吸收檢測器（UVD）是HPLC中應(yīng)用zui廣泛的檢測器之一，幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測器。其特點是靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對強吸收物質(zhì)檢測限可達(dá)1ng，檢測后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測器串聯(lián)使用。紫外可見檢測器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計相似，實際上就是裝有活動地的紫外可見光度計。

（1）紫外吸收檢測器：

    紫外吸收檢測器常用氘燈作光源，氘燈則發(fā)射出紫外-可見區(qū)范圍的連續(xù)波長，并安裝一個光柵型單色器，其波長選擇范圍寬（190nm～800nm）。它有兩個流通池，一個作參比，一個作丈量用，光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上，若兩流通池都通過純的均勻溶劑，則它們在紫外波長下幾乎無吸收，光電管上接受到的輻射強度相等，無信號輸出。當(dāng)組分進(jìn)進(jìn)丈量池時，吸收一定的紫外光，使兩光電管接受到的輻射強度不等，這時有信號輸出，輸出信號大小與組分濃度有關(guān)。

局限：活動相的選擇受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶劑不能做        活動相，每種溶劑都有截止波長，當(dāng)小于該截止波長的紫外光通過溶劑時，溶劑的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收檢測器的工作波長不能小于溶劑的截止波長

（2）光電二極管陣列檢測器（photodiode array detector，  PDAD）：

    也稱快速掃描紫外可見分光檢測器，是一種新型的光吸收式檢測器。它采用光電二極管陣列作為檢測元件，構(gòu)成多通道并行工作，同時檢測由光柵分光，再進(jìn)射到陣列式接收器上的全部波長的光信號，然后對二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù)，得到吸收值(A)是保存時間(tR)和波長(l)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時觀察與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù)，從而迅速決定具有*選擇性和靈敏度的波長。

下圖是單光束二極管陣列檢測器的光路圖。光源發(fā)出的光先通過檢測池，透射光由全息光柵色散成多色光，射到陣列元件上，使所有波長的光在接收器上同時被檢測。陣列式接收器上的光信號用電子學(xué)的方法快速掃描提取出來，每幅圖象僅需要10ms，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過色譜流出峰的速度，因此可隨峰掃描。